Posted by on 1 lipca 2018

Produkcja ATP przy użyciu wszystkich innych kombinacji substratów była normalna lub tylko nieznacznie zmniejszona. Dlatego podejrzewaliśmy zaburzenie funkcji AGC1 w mięśniach. Analiza sekwencji DNA
Figura 3. Figura 3. Mutacja Q590R w genie kodującym mitochondrialny asparaginian-glutaminian izoformy SLC25A12 (AGC1). W panelu A bezpośrednie sekwencjonowanie zmutowanego genu SLC25A12 od pacjenta i genu typu dzikiego z kontrolnej pokazuje homozygotyczne przejście A . G przy nukleotydzie 1769, w wyniku czego podstawienie aminokwasu Q590R w białku AGC1. W panelu B, dopasowanie aminokwasów pokazuje, że Q590 jest wysoce konserwatywny w nośnikach asparaginian-glutaminian AGC, AGC1 i AGC2, ale nie w innych mitochondrialnych nośnikach, w tym pokrewnych nośnikach glutaminianowych GC1 i GC2. Bloki tego samego koloru pokazują grupy tych samych lub podobnych aminokwasów. Ludzki AGC1 ma numer dostępu do Narodowego Centrum Informacji Biotechnologicznej NP_003696.2. Af oznacza Aspergillus fumigatus, Ag Anopheles gambiae, Bt Bos taurus, Dd Dictyostelium discoideum, Dm Drosophila melanogaster, Dr Danio rerio, Hs Homo sapiens, Gg Gallus gallus, Mm, Mus musculus, Nc Neurospora crassa, Nf Neosartorya fischeri, Nv Nasonia vitripennis, Rn Rattus norvegicus, Sc Saccharomyces cerevisiae i Xt Xenopus tropicalis. Panele C i D pokazują strukturalno-homologiczne modele AGC1, ilustrujące konsekwencje mutacji Q590R. Dokowanie asparaginianu (przedstawione w reprezentacji van der Waalsa, zabarwione na żółto) w AGC1 dzikiego typu Q590 (panel C) i mutanta Q590R AGC1 (panel D) pokazano od strony bocznej. Reprezentacje kija uwydatniają niektóre reszty, które znajdują się w obrębie 4 Ł podłoża. Fragmenty helisy I i II (w panelach C i D) oraz części sieci mostków solnych (tylko w panelu C) są przezroczyste, aby ułatwić oglądanie substratu i łańcuchów bocznych niektórych aminokwasów. Pokazano transbłonowe helisy . H1 do H6, a purpurowe powierzchnie podświetlają sieć mostków solnych między resztami D348 i K451, E448 i K543 oraz D540 i K351.
Sekwencjonowaliśmy wszystkie 18 egzonów i połączeń egzon-intron SLC25A12 (National Center for Biotechnology Information GeneID 8604) ze zamplifikowanego genomowego DNA, stosując zestaw (Big Dye Terminator v3.1 Cycle Sequencing kit, Applied Biosystems) i analizator DNA (model 3730 , Applied Biosystems). Znaleźliśmy przejście homozygotyczne c.1769A . G, powodujące mutację missense Q590R, w eksonie 17 (Figura 3A). Oboje rodzice byli heterozygotyczni pod względem mutacji, która była nieobecna w 100 nietkniętych szwedzkich kontrolach, z których każdy miał czterech szwedzkich dziadków.
Funkcja i ekspresja zmutowanego AGC1
Dzikiego typu i zmutowane (Q590R) AGC1 wytworzono w Escherichia coli CO214 (DE3), zmutowanym szczepie E. coli BL21 (DE3) i liposomy rekonstytuowano zrekombinowanymi białkami w obecności asparaginianu lub glutaminianu, jak opisano wcześniej. 1,7 Usunęliśmy zewnętrzny substrat z proteoliposomów za pomocą chromatografii ekstruzyjnej, rozpoczęto transport w 25 ° C przez dodanie [14C] asparaginianu lub [14C] glutaminianu do proteoliposomów i zakończono transport przez dodanie 5 -fosforanu pirydoksalu do końcowego stężenia 15 mM i bathofenantroliny w stężeniu 10 mM.1 Ilość białek typu dzikiego i zmutowanych włączonych do liposomów wynosiła około 20% ilości dodanej do mieszaniny do rekonstytucji
[więcej w: wzorcowanie przyrządów pomiarowych, wdrożenia magento, hologramy els ]

Powiązane tematy z artykułem: hologramy els wdrożenia magento wzorcowanie przyrządów pomiarowych

Posted by on 1 lipca 2018

Produkcja ATP przy użyciu wszystkich innych kombinacji substratów była normalna lub tylko nieznacznie zmniejszona. Dlatego podejrzewaliśmy zaburzenie funkcji AGC1 w mięśniach. Analiza sekwencji DNA
Figura 3. Figura 3. Mutacja Q590R w genie kodującym mitochondrialny asparaginian-glutaminian izoformy SLC25A12 (AGC1). W panelu A bezpośrednie sekwencjonowanie zmutowanego genu SLC25A12 od pacjenta i genu typu dzikiego z kontrolnej pokazuje homozygotyczne przejście A . G przy nukleotydzie 1769, w wyniku czego podstawienie aminokwasu Q590R w białku AGC1. W panelu B, dopasowanie aminokwasów pokazuje, że Q590 jest wysoce konserwatywny w nośnikach asparaginian-glutaminian AGC, AGC1 i AGC2, ale nie w innych mitochondrialnych nośnikach, w tym pokrewnych nośnikach glutaminianowych GC1 i GC2. Bloki tego samego koloru pokazują grupy tych samych lub podobnych aminokwasów. Ludzki AGC1 ma numer dostępu do Narodowego Centrum Informacji Biotechnologicznej NP_003696.2. Af oznacza Aspergillus fumigatus, Ag Anopheles gambiae, Bt Bos taurus, Dd Dictyostelium discoideum, Dm Drosophila melanogaster, Dr Danio rerio, Hs Homo sapiens, Gg Gallus gallus, Mm, Mus musculus, Nc Neurospora crassa, Nf Neosartorya fischeri, Nv Nasonia vitripennis, Rn Rattus norvegicus, Sc Saccharomyces cerevisiae i Xt Xenopus tropicalis. Panele C i D pokazują strukturalno-homologiczne modele AGC1, ilustrujące konsekwencje mutacji Q590R. Dokowanie asparaginianu (przedstawione w reprezentacji van der Waalsa, zabarwione na żółto) w AGC1 dzikiego typu Q590 (panel C) i mutanta Q590R AGC1 (panel D) pokazano od strony bocznej. Reprezentacje kija uwydatniają niektóre reszty, które znajdują się w obrębie 4 Ł podłoża. Fragmenty helisy I i II (w panelach C i D) oraz części sieci mostków solnych (tylko w panelu C) są przezroczyste, aby ułatwić oglądanie substratu i łańcuchów bocznych niektórych aminokwasów. Pokazano transbłonowe helisy . H1 do H6, a purpurowe powierzchnie podświetlają sieć mostków solnych między resztami D348 i K451, E448 i K543 oraz D540 i K351.
Sekwencjonowaliśmy wszystkie 18 egzonów i połączeń egzon-intron SLC25A12 (National Center for Biotechnology Information GeneID 8604) ze zamplifikowanego genomowego DNA, stosując zestaw (Big Dye Terminator v3.1 Cycle Sequencing kit, Applied Biosystems) i analizator DNA (model 3730 , Applied Biosystems). Znaleźliśmy przejście homozygotyczne c.1769A . G, powodujące mutację missense Q590R, w eksonie 17 (Figura 3A). Oboje rodzice byli heterozygotyczni pod względem mutacji, która była nieobecna w 100 nietkniętych szwedzkich kontrolach, z których każdy miał czterech szwedzkich dziadków.
Funkcja i ekspresja zmutowanego AGC1
Dzikiego typu i zmutowane (Q590R) AGC1 wytworzono w Escherichia coli CO214 (DE3), zmutowanym szczepie E. coli BL21 (DE3) i liposomy rekonstytuowano zrekombinowanymi białkami w obecności asparaginianu lub glutaminianu, jak opisano wcześniej. 1,7 Usunęliśmy zewnętrzny substrat z proteoliposomów za pomocą chromatografii ekstruzyjnej, rozpoczęto transport w 25 ° C przez dodanie [14C] asparaginianu lub [14C] glutaminianu do proteoliposomów i zakończono transport przez dodanie 5 -fosforanu pirydoksalu do końcowego stężenia 15 mM i bathofenantroliny w stężeniu 10 mM.1 Ilość białek typu dzikiego i zmutowanych włączonych do liposomów wynosiła około 20% ilości dodanej do mieszaniny do rekonstytucji
[więcej w: wzorcowanie przyrządów pomiarowych, wdrożenia magento, hologramy els ]

Powiązane tematy z artykułem: hologramy els wdrożenia magento wzorcowanie przyrządów pomiarowych